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细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒
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细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒公司正在出售的产品:100mL MES Buffer,0.5M,pH9.0 MES Buffer,0.5M,pH9.0 常温保存100次 鸟类种属鉴定PCR Mix(线粒体CO1基因) Animal DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存2 ug pMAl-c2E pMAl-c2E 低温运输,-20℃保存明胶蛋白胨 Gelatin Pepto
  细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒的详细资料:

培养操作步骤

1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

产品参数:

中文名称

英文名称

产品规格

产品货号

细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒


100T

BJ-01X6688

商品详细介绍:

用途:

快速简便的细胞凋亡检测

注意事项:

由固定液、染色液、荧光封片剂组成,贴壁细胞,适用于悬浮细胞和组织切片。

储存条件:-20℃,避光,12个月

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

2.png 

实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;

2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点:

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。

2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。

4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。

5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。

6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

2 ug pProEX-Htb pProEX-Htb 低温运输,-20℃保存 0.625-40 ng/ml 人表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒

50T 军团菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)  低温运输,-20℃保存 78-5000 pg/mL 人NAD依赖性脱乙酰sirtuin-1(SIRT1)ELISA试剂盒

25 T 超微量ATP测试盒(测Na+K-ATPase) Oxidative Stress Detection Kit 常温保存

0.1mL×10 Tuner(DE3) 感受态 Tuner(DE3) Competent Cell -80℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Deoxyribonuclease-1

50mL Aluminum Chloride Solution(氯化铝溶液),0.5M   Aluminum Chloride Solution,0.5M   常温保存 0.156-10 nmol/L ELISA Kit for Human Apolipoprotein C-III

碘伏(液体) Povidone-iodine (liquid) 500g

乳酸杆菌琼脂培养基 Lactobacillus Agar Medium 250g伊红美蓝琼脂 (EMB)进口、国产Eosin-Methylene Blue Agar弱选择性培养基、用于分离肠道致病菌,特别是大肠杆菌(SN标准)250

500U Long-Taq DNA聚合 Long-Taq DNA Polymerase -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人粒集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒

2mL dATP溶液,2.5mM dATP Solution -20℃保存 78-5000 pg/mL 人乙醇脱氢(ADH)ELISA试剂盒

50T 蓝舌病毒PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human R-spondin-1

300U T7 DNA 聚合(未修饰) T7 DNA Polymerase(unmodified) -20℃保存 0.78-50 ng/mL 小鼠钙结合蛋白(CALB1)ELISA试剂盒

细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒纤维二糖-E(CC)琼脂 英文名称:Cellobiose-polymyxin E Agar 产品规格:250g

人甲酰甲硫(fMet)免疫试剂盒进口、分装

BairdParker琼脂基础 英文名称:BairdParker Agar Medium 产品规格:250g

人促肾上腺皮质激素(ACTH)免疫试剂盒现货供应

胆酸 : 81-25-4 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

DAB2互作蛋白(DAB2IP)免疫试剂盒*直销

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