细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 中文名称:Ac-LEED-FMK(caspase 13 抑制剂) 英文名称:Caspase 13 Inhibitors Z-AEVD-FMK 产品规格:20μl 产品货号:BJ-01X7021 英文名称:Caspase 13 Inhibitors Z-AEVD-FMK 产品规格:20μl 浓度:2mM in DMSO 分子式:C32H45FN4O12 分子量:696.7 纯度:≥95%(HPLC) 储存:-20℃,有效期12个月 |
细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) Trichuris ovis绵羊鞭虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rad52 Rad52抗体 规格: 0.1ml Burkholderia gladioli pv. alliicola洋葱腐烂病PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周H5N1 Hemagglutinin A型毒H5N1凝集素 规格: 1ml Eperythrozoon coccoides鼠附红 体(鼠嗜血支原体)PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 负20度 一年 2-3周LBP1/Upstream Binding Protein 1 上游结合蛋白1抗体 规格: 0.1ml Foot-and-Mouth Disease Virus(FMDV)口蹄疫病毒通用RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周ABCG1 三磷酸苷结合盒亚家族G1抗体 0.1ml Haemophilus influenzae流感嗜血杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周PCGF3/RNF3 环指蛋白3抗体 规格: 0.2ml Herba spirodelae浮萍染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周RABX5/Rabex5 G蛋白相关RABX5抗体 规格: 0.2ml Orf Virus(ORFV)羊口疮病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit Anti-rat IgG/Cy5.5 Cy5.5标记的兔抗大鼠IgG 规格: 0.1ml Human Herpesvirus-6A(HHV-6A)人疱疹病毒6A型探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Kif14 protein 驱动蛋白家族Member14蛋白抗体 规格: 0.2ml Herba dendrobii石斛探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周SLC14A1/RACH1 尿素转运型糖蛋白抗体 规格: 0.2ml Mycobacterium bovis BCG牛分枝杆卡介苗LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周ESRRG/Estrogen Related Receptor gamma 雌激素受体相关蛋白3抗体 规格: 0.2ml Ac-LEED-FMK(caspase 13 抑制剂)人S100钙结合蛋白A8/钙粒蛋白A(S100A8)免疫试剂盒现货供应 猪碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)免疫试剂盒现货供应 犬白介素1α(IL1A)免疫试剂盒进口、组装 小鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)免疫试剂盒进口、组装 鸡延伸因子Tu,线粒体(TUFM)免疫试剂盒现货供应 小鼠白介素4(IL-4)免疫试剂盒进口、分装 大鼠血清素受体2A/5-羟色胺受体2A(5-HT-2A)免疫试剂盒进口、分装 兔子白介素18(IL-18)免疫试剂盒进口、组装 大鼠胶原吡啶交联(PYD)免疫试剂盒现货供应 人乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)免疫试剂盒*直销 大鼠E钙黏蛋白/上皮钙黏蛋白(E-Cad)免疫试剂盒*直销
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