培养操作步骤 : 1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中; 5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 产品参数: 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 | 电镜脱钙液 |
| 100ml|500ml | BJ-01X6794 |
商品详细介绍: 用途: 骨组织标本的电镜脱钙 注意事项: 主要由EDTA等组成。密质骨3-4周,松质骨7-10天。 储存条件:室温,12个月 |
实验报告: 一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 实验要点及说明: 1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理; 3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 操作要点: 1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。 Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1M-K)人免疫缺陷病毒1型M群K型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周GNRPX/PLEKHJ1 核苷酸结合蛋白X抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgM/Bio 标记的兔抗小鼠IgM 规格: 0.3ml Fructus citri sarcodactylis佛手探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周PERK 蛋白激样内质网激抗体 规格: 0.2mlG3BP1 Ras GTP活化蛋白结合蛋白1抗体 规格: 0.1ml Dhori Virus多里病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周phospho-IRS1(Thr176) 磷酸化胰岛素受体底物1抗体 规格: 0.1mlACADVL 酰基辅A脱很链抗体 0.2ml Trichinella nativa乡土旋毛虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周SEMA4D/CD100 臂板蛋白4D抗体 规格: 0.2mlGoat Anti-Bovine IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的羊抗牛IgG 规格: 0.1ml Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus(SADS-CoV)猪急性腹泻综合征RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 负20度 一年 3-4周human Fibrinogen 抗体 规格: 0.2mlFactor X 凝因子10抗体 规格: 0.2ml Gallid Herpesvirus 1禽疱疹病毒1型LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Somatostatin/GRIH 生抑素抗体 规格: 0.1mlPhospho-Ack1(Tyr326) 磷酸化Ack1抗体 0.1ml Feline Immunodeficiency Virus(FIV)猫免疫缺陷病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周C9orf86 9号染色体开放阅读框86抗体 规格: 0.2mlD.Aspartic acid D型天冬抗体 规格: 0.1ml Greeneria uvicola葡萄苦腐病PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CCDC147 卷曲螺旋结构域蛋白147抗体 规格: 0.2mlMLX 转化因子样蛋白4抗体 规格: 0.2ml 螺源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周H Cadherin/CDH13 心脏钙粘蛋白抗体 规格: 0.2mlMouse Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的小鼠抗豚鼠IgG 规格: 0.1ml Encephalitozoon spp.脑胞内原虫属通用·探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周C11orf21 11号染色体开放阅读框21抗体 规格: 0.2mlRabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的兔抗小鼠k链 规格: 0.1ml 电镜脱钙液白E Fc段受体Ⅰ(FcεRⅠ)免疫试剂盒进口、组装 新生(125ug/支) 英文名称: 产品规格:125ug/支*5 人解整合素样金属蛋白10(ADAM10)免疫试剂盒进口、分装 抗生素检定培养基7号 英文名称:Antibiotic Agar NO.7 产品规格:250g 人弹性蛋白(ELN)免疫试剂盒现货供应 HBI霍乱弧菌生化鉴定条(SN) 英文名称: 产品规格:5条/盒 人G蛋白偶联受体152(GPR152/PGR5)免疫试剂盒*直销 猪促甲状腺素(TSH)免疫试剂盒*直销 牛一氧化氮(NO)免疫试剂盒现货供应 小鼠内脏脂肪特异性丝蛋白抑制剂(vaspin)免疫试剂盒进口、分装 鸡巨噬细胞替代激活相关化学因子1(AmAC-1)免疫试剂盒*直销 |