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肾成纤维细胞规格
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产品型号:
产品报价:
2680
产品特点:
肾成纤维细胞规格在冷冻保存之前,应观察细胞生长是否良好 且存活率高,冻存的细胞密度为80 – 90 %冷冻前检测细胞是否保有其特有性质,例如是否有杂细胞或者支原体等。
  肾成纤维细胞规格的详细资料:

本公司代理ATCC细胞,提供售前售后一条龙服务,若要获取详细的说明书或价格信息,请咨询在线客服。

产品名称

英文名称

规格

肾成纤维细胞规格

Human renal fibroblasts

5×105cells

产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体,包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等兼容。

细胞培养技巧:
一、冻存时的注意事项:
1. 在冷冻保存之前,应观察细胞生长是否良好(log phase) 且存活率高,冻存的细胞密度为80 – 90 %
2. 冷冻前检测细胞是否保有其特有性质,例如是否有杂细胞或者支原体等。
3. 使用的DMSO 应为试剂级等级,以5~10 ml 小体积分装,4 度避光保存,勿作多次解冻。使用的甘油也应为试剂级等级,以高压蒸汽
灭菌后避光保存。在开启后一年内使用,因长期储存后对细胞会有毒性。
4. 冷冻保存的细胞浓度:
4-1. 正常的成纤维细胞: 1-3x 10^6 cells/ml
4-2 杂交瘤细胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,细胞浓度不要太高,某些杂交瘤会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后。
4-3.贴壁肿瘤细胞: 1 x 10^6,依细胞种类而异。腺癌类的细胞解冻后须较高之浓度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。
4-4. 悬浮细胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴类细胞须至少5 x 10^6 cells/ml。
5. 冷冻保护剂浓度为5 %或10 % DMSO,若是不确定细胞之冷冻条件,在做冷冻保存之同时,亦应作一个backup culture,以防止冷冻失败。 
冻存的步骤:
1. 冷冻前一日前更换半量或全量培养基,观察细胞生长情形。
2. 使用ScienCell冻存液 混合均匀,置于室温下待用。
3. 依细胞传代培养的操作,收集培养好的细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。
4. 离心,去除上清液,加入适量冷冻保存溶液,使细胞浓度为1-5 x 10^6 cells/ml,混合均匀,
分装于已标示完全之冷冻保存管中,1 ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。
5. 冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 度10 分钟→ -20 度 30 分钟→ -80 度16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。
6. 冷冻保存方法2: 冷冻管置于已设定程序之等速降温机中,再放入液氮槽中。程序为: program 7: HB CELL 。
培养操作步骤
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中; 
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

兔胰岛素原(PI)酶联免疫吸附测定试剂盒

兔肿瘤蛋白P53(TP53)酶联免疫吸附测定试剂盒

兔基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)酶联免疫吸附测定试剂盒

兔胱天蛋白酶4(CASP4)酶联免疫吸附测定试剂盒

VI型胶原α1(COL6α1)酶联免疫吸附测定试剂盒

兔封闭蛋白3(CLDN3)酶联免疫吸附测定试剂盒

兔信号传导转录激活因子6B(STAT56B)酶联免疫吸附测定试剂盒

兔可溶性肿瘤坏死因子-1(sTNF-1)酶联免疫吸附测定试剂盒

兔抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)酶联免疫吸附测定试剂盒  

β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)酶联免疫吸附测定试剂盒

兔铜蓝蛋白(CP)酶联免疫吸附测定试剂盒

兔黑色素瘤相关抗原(MAGE)酶联免疫吸附测定试剂盒

兔弹性蛋白酶3B(ELA3B)酶联免疫吸附测定试剂盒  

兔生长分化因子7(GDF7)酶联免疫吸附测定试剂盒

肾成纤维细胞规格phospho-RPS6KB1(Thr 412)   磷酸化核糖体S6蛋白激酶抗体 规格: 0.1ml

ProSAPiP1   含脯氨酸突触相关蛋白相互作用蛋白1抗体 规格: 0.2ml

Tenascin C/Tn-C  细胞粘合素(固生蛋白)抗体 规格: 0.1ml

Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的羊抗兔IgG 规格: 0.1ml

CK19/CK17/CK14/CK10/CK42  细胞角蛋白19,17,14,42,10抗体 规格: 0.1ml

RNF156  环指蛋白156抗体 规格: 0.2ml

ABCA9  三磷酸苷结合盒转运蛋白9抗体 规格: 0.2ml

HPV16-E7  人类状瘤病毒16-E7抗体 规格: 0.2ml

phospho-c-Abl(Tyr89)  磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体 0.1ml

RAB2/RAB2A  ras基因家族Rab2抗体 规格: 0.2ml

Rabbit Anti-Guinea pig IgG/Cy7  Cy7标记的兔抗豚鼠IgG 规格: 0.1ml

AQP4  水通道蛋白-4抗体 规格: 0.1ml

HDL/high density lipoprotein  高密度脂蛋白抗体 规格: 0.1ml

Mouse Anti-human IgM/Cy3  Cy3标记的小鼠抗人IgM 规格: 0.1ml

 

 

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