我们知道,ELISA试剂盒可分为多种类型测定,是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。 我公司技术部将各种ELISA常用方法的优势劣势进行对比,结果如下:
一、直接法:将抗原直接固定在固相载体上,加入酶标记的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。
优势:操作手续简短,因无须使用二抗可避免交互反应。
劣势:试验中的一抗都得用酶标记,但不是每种抗体都适合做标记,费用相对提高。
二、间接法:此测定方法与直接法类似,差别在于一级抗体没有酶标记,改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。
优势:二抗可以加强信号,而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它zui多的免疫反应性。
劣势:交互反应发生的机率较高。
三、双抗体夹心法:被检测的抗原包被在两个抗体之间,其中一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量;或不标记,再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取,才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。
优势:高灵敏、高专一性,抗原无须事先纯化。
劣势:抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。
Aggrecan 软骨蛋白聚糖/可聚蛋白多糖抗原
EXPB-2 植物延展素-β(抗原)
FAS (Apo-a1; CD95;)(抗原) 载脂蛋白-a1
Agtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a) 血管组织血管紧张素Ⅱ1型受体抗原
FasL(抗原)
Ah Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor) 芳香烃受体抗原
Fe65 protein peptide Fe65 蛋白(多肽抗原)
FGF1 (aFGF )(ECGF-beta)(HBGF-1) 肝素结合生长因子( 酸性成纤维细胞生长因子)(多肽片断抗原)
fgL2 (Fibrinogen-like 2) 凝血酶原酶 (又称:纤维介素蛋白;前凝血素)
FLIP S/L peptide 凋亡调节基因之一(多肽抗原)
FoxP3 叉头蛋白3-T细胞转录因子(多肽抗原)
GAP-43 ( Growth associated protein-43 ) 生长相关蛋白-43(抗原)
Gastrin 胃泌素(抗原)
AMACR/P504S(alpha-methylacyl-CoA racemase) α-甲基酰基辅酶A消旋酶抗原