用于检测未知抗原的双抗体夹心法（eg：ELISA双抗体夹心法测定培养上清中IFN-γ水平）操作步骤：

1、包被：取空白 96 孔板，按 COA 用 PBS 稀释捕获抗体，每孔 100μl捕获抗体工作液，室温过夜；

2、洗板：每孔 350μl洗液，洗板 3 次；

3、封闭：加入封闭液 200 μL/孔封闭 ELISA 板，室温孵育 1h；

4、洗板：甩去板中的封闭液体，加入洗液 350μL/孔，洗板 3 次；

6、加样：取出包被封闭好的 96 孔板，分别加入 100μl标准品或稀释好的样品，标准品做复孔，室温孵育 2h；

7、洗板：每孔 350μl洗液，洗板 3 次；

8、加酶标抗体：按 COA 用稀释液稀释检测抗体，每孔 100μl检测抗体工作液，室温孵育 2h；

9、洗板：每孔 350μl洗液，洗板 3 次；

10、加入底物：每孔 100μl显色液，室温避光孵育 20min，连续观察颜色变化；

11、加终止液：每孔 50μl终止液，轻柔混匀；

12、读板：检测根据酶标仪器操作方法，上机检测 OD值，通过计算获得所测物质的浓度。