1、 吸出培养板中的培养基，用yi蛋白酶消化细胞，然后加入适量的培养基将培养板上的细胞冲洗干净。悬浮细胞可以省略该步骤。

2、 将细胞悬浮液收集到离心管中，在2-8℃下以1000×g离心5分钟，然后吸去培养基，用预冷PBS洗涤细胞3次。

3、 加入适量的预冷PBS（建议在使用前立即加入蛋白酶抑制剂）重悬细胞。在6孔培养板（约1×106个细胞）中，每个孔加入150-250μL的PBS来重悬细胞。

4、 使样本在-20℃或-80℃条件和室温条件下反复冻融，重复冻融过程数次，直至细胞*裂解。也可以使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解细胞。

5、 2-8℃下以1500×g离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。