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ELISA试剂盒实验原理与标本处理
点击次数:164 发布时间:2020-12-09

ELISA试剂盒试验原理:

被石蜡包埋的组织切片在二甲苯中脱去石蜡并逐级水化后,进行内源性的过氧化物酶淬灭。内源性过氧化物酶可以被甲醇或Zymed's Peroxo-Block (目录号:00-2015)中的3%的过氧化氢所抑制。
说明:非免疫血清用来去除非特异性背景。孵育一抗后,加入二抗,再经过一步冲洗,加入链霉亲和素过氧化物酶藕联物。

ELISA试剂盒操作步骤:

1.使用前将ELISA试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀,置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。

6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。

7.洗涤,同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。

ELISA试剂盒样本处理:

1.刚取得的新鲜组织样本用PBS洗净。

2.准确称取50mg组织,加入1ml匀浆缓冲液A,用玻璃匀浆器充分匀浆。

3.在1000g,4℃离心10分钟,弃沉淀,取上清。 

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