细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：高保真KOD试剂盒供应商

英文名称：

产品规格：50U/200U/1000U

产品货号：BJ-01X6527

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

英文名称Mouse Cardiolipin IgA ELISA Kit小鼠心磷脂抗体Cardiolipin IgA(ACAIgA)规格：96T/48T

英文名称Mouse GATA4 ELISA Kit小鼠心肌转录因子（GATA4）规格：96T/48T

英文名称Mouse cardiotrophln-1 ELISA Kit小鼠心肌营养素1(CT-1)规格：96T/48T

英文名称Mouse B1-AR ELISA Kit小鼠心肌细胞膜B1-AR规格：96T/48T

英文名称Mouse cardiac troponin I ELISA Kit小鼠心肌肌钙蛋白I(cTNI) 规格：96T/48T

英文名称Mouse Fibronectin ELISA Kit小鼠纤维连接蛋白(FN)规格：96T/48T

英文名称Mouse FDP ELISA Kit小鼠纤维蛋白原降解产物(FDP)规格：96T/48T

英文名称Mouse FB ELISA Kit小鼠纤维蛋白原（FB）规格：96T/48T

英文名称Mouse PAI ELISA Kit小鼠纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)规格：96T/48T

英文名称Mouse PAI-1 ELISA Kit小鼠纤溶酶原激活剂抑制因子1(PAI-1) ELISA试剂盒规格：96T/48T

英文名称Mouse PAP ELSIA Kit小鼠纤溶酶-抗纤溶酶复合物检测(PAP)规格：96T/48T

英文名称Mouse Cyclin D3 ELISA Kit小鼠细胞周期素D3(Cyclin D3)规格：96T/48T

英文名称Mouse Cyclin D2 ELISA Kit小鼠细胞周期素D2(Cyclin D2)规格：96T/48T

英文名称Mouse Cyclin D1 ELISA Kit小鼠细胞周期素D1(Cyclin D1)规格：96T/48T

英文名称Mouse Cytochromo P450 ELISA KIT小鼠细胞色素P450规格：96T/48T

英文名称Mouse Cytochrome C ELISA Kit小鼠（Cytochrome C）规格：96T/48T

英文名称Mouse ICAM-3 ELISA Kit小鼠细胞间粘附分子-3(ICAM-3)规格：96T/48T

英文名称Mouse ICAM-2/sCD102 ELISA Kit小鼠细胞间粘附分子-2(ICAM-2/sCD102)规格：96T/48T

英文名称Mouse ntercellular adhesion molecular 1, ICAM-1,CD54 ELISA KIT小鼠细胞间粘附分子1(ICAM-1)规格：96T/48T

英文名称Mouse Motilin ELISA Kit小鼠胃动素（MTL）规格：96T/48T

英文名称Mouse microalbunminuria ELISA KIT小鼠微量白蛋白尿（ALB）规格：96T/48T

英文名称Mouse DPD ELISA Kit小鼠脱氧吡啶吩（DPD）规格：96T/48T

英文名称Mouse DHEA-S-7 ELISA Kit小鼠脱氢表雄酮-S-7（DHEA-S-7） 规格：96T/48T

英文名称Mouse DHEA ELISA Kit小鼠脱氢表雄酮（DHEA）规格：96T/48T

英文名称Mouse HA ELISA Kit小鼠透明质酸(HA)规格：96T/48T

英文名称Mouse HCY ELISA Kit小鼠同型半胱氨（HCY）规格：96T/48T

英文名称Mouse Glycogen phosphorylase MM ELISA Kit小鼠糖原磷酸化酶同工酶MM（GPMM）规格：96T/48T

英文名称Mouse Glycogen phosphorylase II ELISA Kit小鼠糖原磷酸化酶同工酶II（GPII）规格：96T/48T

英文名称Mouse Glycogen phosphorylase BB ELISA Kit小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB（GPBB）规格：96T/48T

英文名称Mouse HbA1c ELISA Kit小鼠糖化血红蛋白（HbA1c）规格：96T/48T

英文名称Mouse carbonic anhydrase ELISA Kit小鼠碳酸酐酶(CA)规格：96T/48T

英文名称Mouse PLGF ELISA kit小鼠肽盘生长因子（PLGF）规格：96T/48T

英文名称Mouse MD2 ELISA Kit小鼠髓样分化蛋白－2（MD2）规格：96T/48T

英文名称Mouse MBP ELISA Kit小鼠髓磷脂碱蛋白（MBP）规格：96T/48T

英文名称Mouse FGF1 ELISA Kit小鼠酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)规格：96T/48T

英文名称Mouse Aquaporin5 ELISA Kit小鼠水通道蛋白5（AQP5） 规格：96T/48T

英文名称Mouse Aquaporin4 ELISA Kit小鼠水通道蛋白4（AQP4）规格：96T/48T

英文名称Mouse Aquaporin3 ELISA Kit小鼠水通道蛋白3（AQP3） 规格：96T/48T

英文名称Mouse Aquaporin2 ELISA Kit小鼠水通道蛋白2(AQP2) 规格：96T/48T

英文名称Mouse Aquaporin1 ELISA Kit小鼠水通道蛋白1（AQP1） 规格：96T/48T

英文名称Mouse Aquaporin0 ELISA Kit小鼠水通道蛋白0（AQP0）规格：96T/48T

英文名称Mouse dihy－drotestosterone ELISA Kit小鼠双氢睾酮(DHT)ELISA试剂盒规格：96T/48T

英文名称Mouse Gehrelin Elisa kit小鼠鼠脑肠肽(Gehrelin) 规格：96T/48T

英文名称Mouse Leptin ELISA kit小鼠瘦素(Leptin)规格：96T/48T

英文名称Mouse Eotaxin-2 ELISA Kit小鼠噬酸性细胞趋化因子-2(Eotaxin-2)规格：96T/48T

英文名称Mouse Eotaxin ELISA Kit小鼠噬酸性细胞趋化因子(Eotaxin)规格：96T/48T

英文名称Mouse CCL24 ELISA Kit小鼠嗜酸性细胞选择性趋化因子2（CCL24） ELISA Kit规格：96T/48T