因此,细胞核的荧光就从红色(G1)变成绿色(S、G2、M),为监控细胞周期进程提供了一种简单的方法。FUCCI系统是基于BacMam 2.0技术,它利用杆状病毒来实现哺乳动物细胞的转导和瞬时表达。BacMam 2.0大大提高了这种基因导入平台的效率和实用性。
过去与BacMam 1.0不兼容的细胞类型(神经元),或转导效果不佳(一些干细胞、CHO)的细胞类型,现在也能通过简单的一步过程定量转导。BacMam 2.0融合了新元件,大大增强了转导效率和表达水平,故性能改善。
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor实现了细胞周期进程和细胞分裂的活细胞成像,它也与固定和透化处理兼容。这种细胞周期传感器是即用型的,操作过程也很简单——只需将Premo™ FUCCI试剂加入您的细胞,孵育过夜,并利用荧光显微镜或流式细胞仪观察即可。
Click-iT® EdU assay则是我们常用的BrdU分析的替代。在DNA合成过程中,核苷类似物EdU(5-乙炔-2’-脱氧尿苷)掺入新生的DNA链中。EdU不是通过抗体检测,而是基于一个click反应——铜催化的叠氮化物和炔烃之间的共价反应。EdU核苷中含有炔烃,而Alexa Fluor或Pacific Blue荧光基团上含有叠氮化物。
利用成像技术、流式细胞术或高内涵分析即可判定群体中S期细胞的比例。Click-iT® EdU标记的一个主要优势在于荧光叠氮化物(分子量<~1,000)的体积远小于BrdU抗体(分子量~150,000),这样EdU可在温和条件下掺入,保留了抗原完整性,从而实现了下游的抗体分析。与BrdU检测需要苛刻条件不同,Click-iT®检测试剂只需要标准的固定和透化即可。
它与延迟成像结合时特别有用。对于固定细胞的成像,Click-iT® EdU标记实现了温和条件下掺入EdU的检测,测定细胞的增殖能力是一种基本方法。Life Technologies推出了一系列产品,可准确地测定细胞在整个细胞周期中的进程。Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor为单个、灵敏的读数。而Click-iT® EdU assay则能检测进入DNA合成期的细胞,并将S期的细胞与其他细胞区分开来。