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ELISA试剂盒实验过程中怎么控制加样和稀释
点击次数:816 更新时间:2019-04-22
ELISA试剂盒实验过程中怎么控制加样和稀释
操作方法:
1.ELISA试剂盒混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl别离加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔平别离加规范品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl别离加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔平别离加规范品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔平别离取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔别离加规范品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度别离为30ng/L,20ng/L ,10ng/L,5ng/L, 2.5ng/L)。
2. ELISA试剂盒加样:别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,ELISA试剂盒然后再加待测样品10μl(样品终究稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔参加酶标试剂50μl,空白孔在外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. ELISA试剂盒显色:每孔先参加显色剂A50μl,再参加显色剂B50μl,悄悄震动混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 停止:每孔加停止液50μl,停止反应(此刻蓝色立转黄色)。
