在这项研究中,研究人员采用了一种具有疏蛋白(protein-repellent)性的柔性聚合物,并以一种可结合蛋白材料作为聚合物的盒状支撑点,通过激光直刻法(Direct Laser Writing Method)制作出一种特殊的聚合物支架。这种支架的疏蛋白结构由25微米高的支柱组成,各个支柱之间通过细棒连接,连接点高度不一,然后盒状支撑点被地放在细棒中间。当含有粘附蛋白的溶液浸入支架时,蛋白只会与盒状支撑点相结合,两小时内,个体细胞占满支架,且只粘附在特定位点。由此,通过改变支撑点和细棒的位置,可实现对细胞形状的三维控制
6、DAB:
6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit:
使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中,即可获得1ml DAB工作液,简单易用。
6.1 ZLI-9030 DAB:
6mgDAB溶于10mlTBS(0.05M pH7.6),再加入0.1ml浓度为3%的H2O2,过滤掉沉淀物,即可。
7、AEC:
4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中,加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液(pH5.2),然后加入0.15ml 3%H2O2,过滤掉沉淀物。
8、RIPA:
1×PBS,1%NP 40,0.5 sodium deoxycholate,0.1% SDS(此液体可长期保存)。以下抑制剂以储存液方式保存,临用前加入RIPA中。
8.1 10mg/ml PMSF异丙醇溶液(用量为10 l/ml)
8.2 Aprotinin(Sigma产品,用量为30 l/ml)
8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液
(用量为10 l/ml)
9、Blotto A:
常规使用1×PBS,5% milk,0.05% Tween 20。
10、Blotto B:
与Phosphotyrosine抗体共用,1×PBS,1% milk,0.05% Tween 20。部分实验中milk可*去除,但可能引起背景增高。