人干扰素ELISA试剂盒实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IFN-β抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IFN-β抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的IFN-β呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成

1.酶联板：一块（96孔）

标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，其浓度为2,000 pg/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成2,000 pg/mL，1,000 pg/mL，500 pg/mL ，250 pg/mL，125 pg/mL，62 pg/mL，31.2 pg/mL，其原液直接作为zui高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/mL，临用前15分钟内配制。

如配制1000 pg/mL标准品：取0.5ml 2,000 pg/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

2.样品稀释液：1×20ml/瓶。

3.检测稀释液A：1×10ml/瓶。

4.检测稀释液B：1×10ml/瓶。

5.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A 1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

6.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。稀释方法同检测溶液A。

7.底物溶液：1×10ml/瓶。

8.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

9.终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

标本的采集及保存

1．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过3个月，-80℃不应超过6个月；标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测；高血脂的标本不需进行特殊处理，可直接检测。

人干扰素ELISA试剂盒操作步骤

实验开始前，请提前配制好所有试剂；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，均应用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100ul（取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。