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博湖试剂-人阿拉伯甘露聚糖ELISA试剂盒取得系列进展
点击次数:838 更新时间:2014-06-09

   人阿拉伯甘露聚糖ELISA试剂盒LAM试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知LAM浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将LAM和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中LAM的浓度呈比例关系。

操作步骤:

 1.   使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2.   根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

3.   加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。

4.   甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5.   每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6.   甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7.   每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。

8.   取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9.   在450nm波长处测定各孔的OD值。

 结 果 判 断 与 分 析:

 1、  仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、  以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的LAM标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的LAM含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

3、  检测值范围: 0-480ng/ml

4、  敏感度:0.1ng/ml

联系人:王经理
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