纯化抗体的定性和定量
在纯化抗体时需要控制好几个指标,包括纯度,含量及抗体的抗原结合活性。
纯度 在实验的任何阶段,确定抗体溶液纯度的zui简单方法是取一部分样本进行SDS-PAGE电泳。凝胶可用考马斯亮蓝染色(灵敏度为0.1—0.5ug/带)或银染(灵敏度1~l0ug/带)。
定量 如果抗体还不纯,有一个快捷的定量方法,即通过SDS-PAGE电泳分离出轻、重链,然后和已知的标准染色带比较。如果需要分析许多样本,用免疫测定法对抗体定量较容易。如果抗体是经过纯化的,可通过测蛋白总量代替上述两种方法,包括附录Ⅱ所述的方法。有一简单的方法,即紫外吸收法。抗体的量可通过测280nm处的吸收值来测(10D大致相当于0.75mg/m1的纯化抗体)。
抗原结合活性 一般说来,用本书建议使用的纯化方法不会引起抗原结合活性的改变。用蛋白G或蛋白A树脂很少导致抗体活性丧失。然而,如果终抗体产物的作用不如原来所预料的好,检测抗体纯化过程所丢失的活性就极为重要。用一系列滴定法比较纯化的抗体和其原材料的活性,以标定每一步中的总抗体量,这将有助于较好的估计通过纯化所丢失的活性。
Anti-CA125 (Ovarian cancer antigen) 卵巢癌抗原抗体
Anti-CA15-3 乳腺癌相关抗原抗体
Anti-CAD/CPAN(Caspase-Activated Deoxyribonuclease) Caspase 激活的脱氧核糖核酸酶抗体
Anti-Casein(bovine) 抗牛酪蛋白抗体
Anti-Calcineurin α /PP-2B alpha 1 蛋白磷酸酯酶-2B催化亚单位抗体
Anti-caldesmon 钙介质素抗体
Anti-Calpain 1 钙蛋白酶抗体
Anti-Calpain 2 (Calcium activated neutral proteinase 2) 钙激活的中性蛋白酶2抗体
Anti-CNN1(Calponin 1) 钙调节蛋白-1抗体
Anti-CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha) 钙/钙调素依赖蛋白激酶2α抗体
Anti-phospho-CaMK2a(pThr286) 磷酸化钙/钙调素依赖蛋白激酶2α抗体
Anti-Camk1g(Calcium/calmodulin dependent protein kinase IG) 钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶IG抗体
Anti-CaMK2b(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II beita) 钙/钙调素依赖蛋白激酶2b抗体