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博湖试剂-IL-4抗CD23单抗检测法
点击次数:742 更新时间:2014-05-20

IL-4抗CD23单抗检测法
 
    IL-4能促进B细胞膜表面CD23分子表达,一些BurkittB淋巴细胞瘤株(如Jijoy细胞)未受刺激时,CD23表达水平很低,经IL-4刺激后,CD23的表达呈剂量依赖性增加。用抗CD23单抗间接免疫荧光法染色,可检测人IL-4活性。
 
    (1)将5X105/mL的Jiioy细胞培养于含10%FCS的RPMI-1640培养液中。
 
    (2)取对数生长期细胞,用新鲜培养液将细胞配成5X 105/mL,接种于24孔板中,lmL/孔。分别加待测标本及标准IL-4(不同稀释度),并设阴性对照,培养48~72h。
 
    (3)洗细胞2次,以106—107/mL浓度的细胞重悬于含1%BSA,2mmoL/L叠氮钠的PBS中。将细胞转人Falcon分析管中,离心弃PBS,加100~L抗CD23单抗(5—10btS/mL),置冰浴中15~30rain,用上述PBS洗2次。
 
    (4)加适当稀释的FITC标记的羊抗鼠IgC,置冰浴15~30rain,同上洗细胞,重悬细胞于含2mmol/mL叠氮钠的PBS中。
 
    (5)用流式细胞仪分析CD23分子的表达,以阳性细胞百分率表示,并计算IL-4活性单位;或用荧光显微镜观察CD23分子的表达。
HCC 94 [HCC941122](子宫鳞癌细胞(高分化))     ATCC    株 
A-431(表皮癌细胞)     ATCC    株 
HeLa 229(宫颈癌细胞)     ATCC    株 
CBRH-7919(肝癌细胞)     ATCC    株 
RH-35(肝癌细胞)     ATCC    株 
SHZ-88(乳腺癌细胞)     ATCC    株 
MLTC-1(睾丸间质细胞瘤细胞)     ATCC    株 
L6565(小鼠L6565白血病克隆细胞系)     ATCC    株 
F9(畸胎瘤细胞)     ATCC    株 
LLC Lewis(肺癌细胞)     ATCC    株 
C127(乳腺肿瘤细胞)     ATCC    株 
MFC(胃癌细胞)     ATCC    株 
B16(黑色素瘤细胞)     ATCC    株 

 

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