各种缓冲液的制备
　 常用的缓冲液和试剂一般包括包被缓冲液、封闭缓冲液、洗涤缓冲液、样品稀释液、酶结合物缓冲液、底物缓冲液、终止液等，在研制试剂时，应根据试剂的种类、试剂的反应原理等，科学、合理选择适当的缓冲液或试剂。

由于去垢剂可以减小缓冲液的表面张力，从而抑制缓冲液中蛋白质与微孔塑料之间的非特异性结合(Engvall and Perlmann，1972)，因此，一般除包被缓冲液外，其他的缓冲液均可添加一定浓度的去垢剂，如Tween 20、Tween 40、Tween 80、grij 35，以及Triton X-100等，以提高试剂的特异性。目前使用zui广泛的为Tween 20，其工作浓度一般不超过0．05％。

实际工作中，使用的包被缓冲液一般为碳酸盐缓冲液(pH9.8，0.1mol／L)，也有研究者称，使用磷酸盐缓冲液PBS(pH7，0.1mol／L)，无论是否添加NaCl，均能获得较好的包被效果。
 
封闭缓冲液可以使用磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液，但需要添加一定浓度(0.1％～1％)的封闭物，如明胶、酪蛋白、BSA、脱脂奶粉或者小牛血清。

孵育缓冲液包括样品稀释液和酶结合物缓冲液，一般使用中性或近中性的磷酸盐缓冲液、磷酸／柠檬酸缓冲液以及Tris缓冲液。为了提高试剂的特异性，推荐使用PBS(至少0.05mol／L，NaCl浓度不高于0.3mol／L)。

洗涤缓冲液一般应和孵育缓冲液相同，但是不含有NaCl，而是添加去垢剂Tween应根据试剂所使用的酶，合理选择底物缓冲液。不同的酶／底物系统需要不同的缓冲液，部分酶还需要特定的辅因子在zui适pH条件才能完成显色反应。一般使用的酶大多数为HRP，其底物缓冲液中应添加非离子去垢剂，如Tween 20或Triton 100(Tijs-sen et al_，1985)。由于叠氮钠是HRP的抑制剂，因此，在选择防腐剂时，建议用0.1％硫柳汞代替叠氮钠。

不同的酶／底物系统可能需要不同的终止液，使用HRP时，尽管叠氮钠和NaCN均可用于终止显色反应，但考虑安全性方面的原因，常用的终止液为硫酸(浓度4mol／L)。