ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种高灵敏度、高特异性的免疫检测方法，广泛应用于科研领域，用于定量检测血清、血浆、组织液等生物样本中的目标蛋白含量。小鼠ELISA试剂盒的使用步骤可分为以下关键环节，结合不同检测原理（如双抗体夹心法、竞争法等）的共性操作整理：

检测流程

1、‌加样与孵育

‌标准品孔‌：加入梯度稀释的标准品（如15μL/孔）。

‌样本孔‌：加入待测样本（15-100μL/孔，依试剂盒要求）。

‌空白孔‌：仅加样本稀释液作为对照。

贴封板膜后，37℃孵育60分钟。

2、‌洗涤步骤‌

弃去孔内液体，每孔加满洗涤液（350μL），静置20秒后甩干，重复洗涤5次。

3、酶标抗体反应‌

每孔加入稀释后的酶标抗体（如100μL），37℃孵育30分钟，再次洗涤5次。

4、‌显色与终止

加入TMB底物（100μL/孔），避光孵育10-15分钟。

加入终止液（50-100μL/孔）终止反应，溶液变黄。

实验前准备

1、‌试剂平衡‌

将试剂盒组分（标准品、酶标抗体、底物等）及样本置于室温（20-25℃）平衡60分钟，避免温度差异影响反应效率。

2、‌洗涤液配制‌

浓缩洗涤液需用去离子水稀释至工作浓度（如20倍稀释），充分混匀后使用。

结果读取

使用酶标仪在450nm波长测定各孔OD值，以标准品浓度绘制标准曲线，计算样本浓度。

注意事项与建议

1、试剂使用前恢复至室温，避免温度差异影响反应。

2、实验过程中避免直接接触底物A/B液和终止液，佩戴手套和护目镜。

3、不同厂家的试剂盒操作略有差异，务必按照所用试剂盒说明书执行。

4、若结果在标准曲线线性范围外，应重新稀释样本后再测。

通过上述步骤，可以准确地使用小鼠ELISA试剂盒检测特定蛋白质或抗原的含量，为科学研究提供重要数据支持。