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决定聚合酶链式反应(PCR)反应特异性因素
点击次数:260 更新时间:2024-11-18
PCR(聚合酶链式反应)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。
PCR反应特异性主要决定因素:
1、引物。引物的结构和长度是PCR特异性的关键。此外,引物浓度过高会增大形成引物二聚体的概率,从而降低PCR特异性。
2、复性温度。在Tm值允许范围内,选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合,提高PCR反应的特异性。
3、延伸时间。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现。
4、Mg2+浓度。Mg2+浓度对PCR扩增的特异性有显著影响。Mg2+浓度过高时,容易出现非特异性扩增,使反应特异性降低。
5、DNA聚合酶的种类和数量。不同种类的酶对PCR特异性的影响程度不同;酶的量过多更容易引起非特异性扩增。
