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ELISA结合物的定量测定方法
点击次数:441 更新时间:2023-09-18

ELISA结合物的定量测定方法: 

一般是对结合物中的酶和IgG进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定,然后按下列公式计算:

酶量(mg/ml)=OD403×0.42

IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.4)×0.94×0.62

对于过碘酸钠氧化法制备的标记抗体量,按下列公式计算:

IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.34)×0.62

已知酶量和IgG量后,即可计算出标记抗体的摩尔(mol)比值。

HRP/IgG摩尔比值=HRP(mg/ml)/IgG(mg/ml)×4

结合物中酶总量=HRP(mg/ml)×结合物溶液量

结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×100%

用于ELISA的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般,为500(g/ml时效果较好,达 1000(g/ml时效果好。mol.比值由于结合物中含的IgG并不wan全可靠,所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般,1.0时效果较好,1.5-2.0时最好。酶结合率为 7%时效果一般,为9%-10%较好,达30%以上时最好。



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