冻存细胞培养操作步骤：

(1) 将一管细胞从液氮罐中取出，注意保护手和眼睛。

(2) 将冻存管快速的放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体*融化。

(3) 将冻存管立即从水浴中拿出，擦干，转入无菌环境。

(4) 用70％的酒精冲洗冻存管，然后擦去多余酒精。

(5) 打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹（注意，由于冻存管有负压，开盖时可能会有少量溢出，这是正常现象）。

(6) 用多聚赖氨酸（或参照说明书）包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。

(7) 盖好培养瓶的盖子，轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。

(8) 将培养瓶放入培养箱中（37℃，5%CO2，95%空气）

(9) 放入培养箱后第6-16小时更换一次培养基，以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。