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大鼠冠状动脉内皮细胞完全培养基操作说明
点击次数:108 发布时间:2021-01-13

 大鼠冠状动脉内皮细胞运输和保存:

1、1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

2、T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

 大鼠冠状动脉内皮细胞生理变化:

(1)       主动脉硬化。

(2)       主动脉瘤

(3)       主动脉钙化。

 大鼠冠状动脉内皮细胞基本特性:

(1)       组织来源于正常大鼠大动脉组织。

(2)       鉴定:肌动蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色。

(3)       原代细胞培养末期液氮冻存。

(4)       每冻存管细胞数:>5×105 cells/1ml。

(5)       肌动蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色验证。

(6)       不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

 大鼠冠状动脉内皮细胞操作流程:

1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器 、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。

2. 为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。

3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。

4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。

5.  大鼠冠状动脉内皮细胞内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。

6. 为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。

7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。

8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。

9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。 

联系人:王经理
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