elisa酶联免疫试剂盒反应步骤:

（1）严格按照试剂说明书进行操作。操作前将试剂在室温下平衡30～60min。

（2）加样后及时放人孵箱。标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。

（3）封板温育时，各孔一定要封严，防止阳性标本的液体蒸发，产生周边现象从而导致“花板"的出现。 

（4）用洗板机洗板时，保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干：还要防止针口有纤维蛋白或异物，ELISA试剂盒这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板"的出现。

（5）合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。

（6）加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

（7）显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。

（8）加样时保持显色剂不外流；A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。

（9）应保证酶标板清洁，整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸。以上的措施可以使“花板"降至zui低限度。elisa酶联免疫试剂盒从而提高检测的特异性。并得到更准确、可靠的实验结果。

elisa酶联免疫试剂盒使用方法：

1. 标准品的稀释：本elisa酶联免疫试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。  

2. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。|

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。