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人Elisa试剂盒操作步骤的事项
点击次数:160 发布时间:2020-10-21

人Elisa试剂盒原理:

人Elisa试剂盒是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验的标准程序,通常是把蛋白、抗体、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗体(capture Ab)固定在固相载体上,再加入一级检测抗体(primarydetection Ab),形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶(enzyme)标记了,即可用来直接测定抗原的量,若无,则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质(substrate),作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系,依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度。

人Elisa试剂盒加样:

人Elisa试剂盒的灵敏度较高,则应该按规定将血清稀释至适当的倍数,以降低非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。 加样品时,单孔用量要求:≥20ul/指标,如需要做2个复孔则血量≥60ul/指标。如果用量充足,提供50ul/孔/指标。具体用量也需根据试剂盒的要求而定。 吸取样品时,加样枪头不应粘附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体,否则会导致液体残留在吸头上,加样不准确。正确加样方法应为45度,吸头贴着孔壁和液面的交界处加入。加样时速度不可过快,否则无法保证微量加样的准确性和均一性;要避免样品加在孔壁上部而产生非特异性吸附。不可将样品溅出以避免对邻近孔产生污染。 

人Elisa试剂盒操作步骤:

1、将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。

2、加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。

3、加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。

4、加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗人Elisa试剂盒,包被和酶标用的抗体分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测。 

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