在操作ELISA试剂盒实验的时候加完显色液(显色一定时间后，再加终止液后，立即测试其吸光度值，等过几分钟再测试吸光度值，发现两次测得的吸光度值发生衰减。第二次均小于次。并且，加终止液时，从1加到第12条后，测试发现，吸光度值从1-12条逐级衰减。

有可能是显色液的质量不够好。一般情况下，终止反应后OD值的下降前期不是很明显。终止后，吸光度值是会随着时间衰减，所以一般是加完终止液后立即测，这样比较准。

再次分析12条显示逐级递减的原因看看是否是：

① 显色时间调整，如果您现在的显色时间是10MIN，那调整到30MIN，再加终止液,观察上述现象是否出现。

② 终止液中加入少量甘油看下怎么样。

ELISA试剂盒显色时间是30分钟，终止后要求在30分钟内检测，加入终止液后，在加入终止液后2到3分终内检测，这是OD值相对比较高。拟合值能达到四个9。