感染细胞的处理方法
点击次数:648 更新时间:2016-06-27
(一)细胞准备
将状态良好的目的细胞接种到24孔板,使细胞浓度为1×105/ml细胞,接种细胞数量因细胞的生长速度而略有不同,一般是保证第二天进行病毒感染的时候细胞汇合率介于50%至70%之间。ELISA试剂盒
(二)病毒感染
1.感染细胞*佳MOI的测定MOI(Multiplicity of Infection,感染复数)是指每个细胞感染的病毒数,通常MOI越高,病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。对于分裂活跃的细胞,比如Hela、293细胞,MOI=1~3时,80%以上的细胞均表达目的基因。而对于非分裂细胞,比如原代细胞,感染效率较低。需要进行MOI梯度摸索实验,选择适合的MOI进行实验。
2.感染步骤
按实验需要将细胞铺板(比如12孔板);细胞数以第2天密度约50%为宜;37℃培养过夜。
对于不适用Polybrene的细胞,以上步骤省略,直接进入下面步骤:
感染前,从冰箱取出并在37℃水浴中快速融化病毒,吸去细胞原有培养基,将病毒原液加入细胞中,轻轻8字混匀。感染后第二天(约12小时),吸去含病毒的培养液,换上新鲜的*培养液,继续37℃培养。感染后48小时,对于带GFP报告基因的病毒,可通过荧光显微镜观测GFP表达效率,对于携带Puromycin抗性基因的病毒,换上含适当浓度的Puromycin的新鲜*培养液,筛选稳定转导的细胞株。
对于Polybrene可施加的细胞:准备*培养基和Polybrene混合物,Polybrene终浓度为摸索得到的zui适终浓度。移去培养基并添加0.5mlPolybrene/培养基混合物于每孔中(适用于24孔板,其他孔板请相应调整体)。
Phospho-HistoneH2A.X(Tyr143)磷酸化组蛋白H2AX抗体
Phospho-HSP27(Ser254)磷酸化热休克蛋白27抗体
phospho-HSP70(Tyr41)磷酸化热休克蛋白70抗体
phospho-HSF1(Ser303)磷酸化热休克因子1抗体
phospho-HSF1(Ser307)磷酸化热休克因子1抗体
phospho-HSP70(Tyr525)磷酸化热休克蛋白70抗体
HACE1E3泛素蛋白连接酶HACE1抗体
Hamartin结节性硬化症蛋白1抗体
HNF4A肝细胞核因子4α抗体
phospho-HNF4(Ser313)磷酸化肝细胞核因子4α抗体
HELLS淋巴特异性解旋酶抗体
HRASLS2HRAS样抑制因子2抗体
HSP40homolog热休克蛋白家族40抗体
RBMX糖蛋白P43抗体
HSD3B7滋养层细胞抗原3β7抗体
HSP22热休克蛋白-22抗体
HRH4组织胺H4受体抗体
ELISA试剂盒
将状态良好的目的细胞接种到24孔板,使细胞浓度为1×105/ml细胞,接种细胞数量因细胞的生长速度而略有不同,一般是保证第二天进行病毒感染的时候细胞汇合率介于50%至70%之间。ELISA试剂盒
(二)病毒感染
1.感染细胞*佳MOI的测定MOI(Multiplicity of Infection,感染复数)是指每个细胞感染的病毒数,通常MOI越高,病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。对于分裂活跃的细胞,比如Hela、293细胞,MOI=1~3时,80%以上的细胞均表达目的基因。而对于非分裂细胞,比如原代细胞,感染效率较低。需要进行MOI梯度摸索实验,选择适合的MOI进行实验。
2.感染步骤
按实验需要将细胞铺板(比如12孔板);细胞数以第2天密度约50%为宜;37℃培养过夜。
对于不适用Polybrene的细胞,以上步骤省略,直接进入下面步骤:
感染前,从冰箱取出并在37℃水浴中快速融化病毒,吸去细胞原有培养基,将病毒原液加入细胞中,轻轻8字混匀。感染后第二天(约12小时),吸去含病毒的培养液,换上新鲜的*培养液,继续37℃培养。感染后48小时,对于带GFP报告基因的病毒,可通过荧光显微镜观测GFP表达效率,对于携带Puromycin抗性基因的病毒,换上含适当浓度的Puromycin的新鲜*培养液,筛选稳定转导的细胞株。
对于Polybrene可施加的细胞:准备*培养基和Polybrene混合物,Polybrene终浓度为摸索得到的zui适终浓度。移去培养基并添加0.5mlPolybrene/培养基混合物于每孔中(适用于24孔板,其他孔板请相应调整体)。
Phospho-HistoneH2A.X(Tyr143)磷酸化组蛋白H2AX抗体
Phospho-HSP27(Ser254)磷酸化热休克蛋白27抗体
phospho-HSP70(Tyr41)磷酸化热休克蛋白70抗体
phospho-HSF1(Ser303)磷酸化热休克因子1抗体
phospho-HSF1(Ser307)磷酸化热休克因子1抗体
phospho-HSP70(Tyr525)磷酸化热休克蛋白70抗体
HACE1E3泛素蛋白连接酶HACE1抗体
Hamartin结节性硬化症蛋白1抗体
HNF4A肝细胞核因子4α抗体
phospho-HNF4(Ser313)磷酸化肝细胞核因子4α抗体
HELLS淋巴特异性解旋酶抗体
HRASLS2HRAS样抑制因子2抗体
HSP40homolog热休克蛋白家族40抗体
RBMX糖蛋白P43抗体
HSD3B7滋养层细胞抗原3β7抗体
HSP22热休克蛋白-22抗体
HRH4组织胺H4受体抗体
ELISA试剂盒