ELISA试剂盒

一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化，不同点如下：

1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其相同。

2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。

3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。

4、免疫荧光在封片时常使用封片剂或甘油：0.01M PBS （1：1）。条件许可，建议购买抗淬灭的封片液，使标本可以保存更久。

5、荧光抗体的孵育以及后续处理需要避光。

6、荧光抗体染色假阳性可能会多，需要分别设定阳性和阴性对照。

二、注意事项

1、荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长，可能会使荧光提前衰退。

2、每次试验均需设置以下三种对照：

（1） 阳性对照：阳性血清+荧光标记物；

（2） 阴性对照：阴性血清+荧光标记物；

（3） 荧光标记物对照：PBS+荧光标记物。

三、免疫荧光双标的经验之谈

1、选取一抗时，要求来源于两种不同的动物，我用的是来源于家兔和大鼠的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti-rat-Tex-Red（红）。

2、我的做法是两种一抗同时孵育，然后两种二抗同时孵育。抗体浓度、孵育时间要自我摸索，我感觉一抗4℃孵育过夜比较好，背景比较清晰。

3、我的阳性对照采用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG，荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。

4、封闭血清是二抗来源动物的正常血清，我用的是10%正常donkey血清。

5、其余事项同免疫荧光单标操作。

Acylglycerol Kinase    甘油酯激酶线粒体抗体
phospho-alpha Adducin(Ser726)    磷酸化内收蛋白a1抗体
ATG16L2    自噬体ATG16L2蛋白抗体
ACPT    睾丸酸性磷酸酶抗体
Acid Phosphatase    酸性磷酸酶抗体
AKIP    极光激酶A相互作用蛋白1抗体
APOL6    载脂蛋白样蛋白6抗体
ARTS    凋亡相关蛋白TGFb信号抗体
A2LD1    A2LD1蛋白抗体
A4GNT    α1,4-N-乙酰葡糖胺转移酶α4Gn-T抗体
AADAC    芳香乙酰胺脱乙酰基酶抗体
AADACL4    芳香乙酰胺脱乙酰基酶样蛋白4抗体
AASDHPPT    氨基乙二酸半醛脱氢酶磷酸泛酰巯基乙胺转移酶抗体
AASS    赖氨酸酮戊二酸还原酶抗体
ANKRD6    锚蛋白重复域6抗体
Arginase II    精氨酸酶2抗体
AKR1C3    醛固酮还原酶家族1成员C3抗体
ACTHR    促肾上腺皮质激素受体
AGRP    褐黑素相关蛋白ART抗体
Adrenodoxin    肾上腺皮质线粒体铁氧还蛋白抗体
Adracalin    Allgrove综合征相关蛋白抗体

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