一、间接免疫碱性磷酸酶法
    ELISA试剂盒基本原理与HRP-抗体间接法类似，体，将其制备成酶标记抗体。其染色步骤如下。
    (1)切片脱蜡至水，PBS洗3min×3次。所不同的是用AKP代替HRP标记第
    (2)蛋白酶消化或AR(组织抗原的暴露或抗原的修复，此步视情况而定)。
    (3)滴加正常血清，阻断20min(减少非特异性背景染色)，吸去多余血清。
    (4)滴加适当稀释的特异性一抗，37℃孵育30～60min或4℃过夜，PBS洗3min×3次。
    (5)适当稀释的AKP标记的二抗37℃孵育30～60min，PBS洗3min×3次。
    (6)加入0．02mol／L(pH9．0)TBS(内含lmmol／L咪唑，5mmol／L MgClz)阻
断内源性碱性磷酸酶。
    (7)ELISA试剂盒切片上滴加50—100~1底物溶液(BCIP／NBT)，室温中湿盒内避光显色30min一48h，显色30min后镜下观察，待阳性充分显示后水洗终止反应。
    (8)充分水洗后用核固红复染5min，冲洗后系列乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。
    (9)结果观察，背景呈红色，阳性产物呈紫蓝色。
    注：染色结果可根据不同的显色底物而显示不同颜色，如用坚固红(FR／AS-MX)产生的底物为玫瑰红色，用坚固蓝(FB／AS-MX)则产物为紫绿色，而BCIP／NBT为紫蓝色。特别要强调的是，FR／AS-MX和FB／AS-MX底物系统产生的颜色反应产物，能溶于有剂溶，如乙醇、二甲苯，所以不能用树胶封片。ELISA试剂盒