DIY夹心法ELISA试剂盒常见技术指南：
1、选择抗体时选择一个单抗和一个多抗进行配对；若选择两个单抗，必须识别不同表位的抗体；从同一家公司选择抗体对。
2、ELISA试剂盒实验中为了确定*信号和zui低背景应将捕获抗体（0.5-4μg/ml）和检测抗体（0.25-2μg/ml）在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
3、标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。
4、一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml 到15pg/ml。可利用标准的ELISA试剂盒操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
5、为了优化灵敏度，建议过夜孵育标准品和标本。
6、若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
7、当测定混合液体中的抗原时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的Ig.Galectin 1    半乳糖凝集素1抗体
ICOS/CD278    诱导协同刺激分子CD278抗体
IL-31    白细胞介素31抗体
IL-28A/IFNL2    白细胞介素28A抗体
IL-32/NK4    白介素32抗体
IL-33/NFHEV    白介素33抗体
ILT2/CD85j    细胞表面免疫球蛋白样转录因子2抗体
Integrin alpha 2/CD49b    整合素α2抗体
Integrin alpha 2b/CD41    血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗体
IL-17RC/IL-17RL    白介素17受体C抗体
IGSF8    免疫球蛋超家族成员8抗体
IL-33    白介素33抗体
Importin 9    核蛋白9抗体（Ran结合蛋白M）
eIF3A    真核翻译起始因子3A抗体
phospho-eIF4G (ser1185)    磷酸化真核翻译起始因子4G抗体
Integrin alpha 4+Beta 7    整合素α4β7抗体
phospho-IRF3 (Ser386)    磷酸化干扰素调节因子3抗体
ISLR2    ISLR2蛋白抗体