1.食品安全检测ELISA试剂盒的操作原理：

ELISA的操作步骤：样品收集保存、试剂准备、温育、洗板、显色、比色、包被、加样、加酶标抗体、终止反应、结果判定、

2．影响因素：

   分子量、稳定性、纯化、包被浓度，抗体纯度和产品质量

尽管ELISA测定的操作步骤非常简单，但有可能会影响测定结果的因素却较多，分布在测定操作的各步之中，尤以加样、温育和洗板为甚。为帮助大家分析查找测定中出现问题的可能原因，特对常见问题及原因归纳总结于下表。

临床ELISA测定中可能会出现的问题及可能的原因

问题可能的原因（非试剂盒本身的原因）

1．弱阳性质控样本检测不出 温育的时间或温度不够；显色反应时间太短；所用配制缓冲液的蒸馏水有问题

2．测定的重复性差 （相同样本两次测定结果不一致） 这是典型的由测定操作引起的问题，包括

（1）加样本及试剂量不准；孔间不一致；

（2）加样过快，孔间发生污染；

（3）加错样本；

（4）加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区；

（5）不同批号试剂盒中组分混用；

（6）温育时间、洗板、显色时间不一致；

（7）孔内污染杂物；

（8）酶标仪滤光片不正确；

（9）血清标本未*凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出现假阳性反应等。

3．白板

（阳性对照不显色） （1）漏加酶结合物；

（2）洗板液配制中出现问题，如量筒不干净，含酶抑制物（如叠氮钠）等。

（3）漏加显色剂A或B；

（4）终止剂当显色剂使用。

4．全部板孔均有显色 （1）洗板不干净；

（2）显色液变质；

（3）加底物的吸光受酶污染；

（4）洗板液受酶等污染。