操作步骤: 1:样品准备:取1毫升细胞培养上清(贴壁和悬浮细胞都可以 已培养48小时以上),在16000g离心5分钟,小心弃去上清,避免丢失沉淀(沉淀量有可能很少,目视看不到)。将沉淀用无菌PBS重悬,在16000g离心5分钟,同样小心弃去上清,如此反复用无菌PBS洗三次 将获得的沉淀用100微升超纯水重悬,置于100℃水浴中孵育5分钟。如此制备好的样品可在4℃保存1到2个月。 2:PCR反应的准备: 待各组份融化后先瞬时离心,然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系,每次实验需加一个阴性和一个阳性对照,测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌,并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染,推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。 服务流程: 接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。 产品名称 | 英文名称 | 货号 | 牡蛎疱疹病毒LAMP试剂盒 | Lamp kit for oyster herpesvirus | BJ-P988359 |
它具有下列特点: 1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。 2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增鲍疱疹样病毒,与其他植物没有交叉反应。 3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。 4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。 5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 使用及效果: PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。 储存条件: 仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 PCR实验方法步骤: 方法 1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。 3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 发酵乳杆菌Anti-Phospho MST1R (Ser1394) Antibody 短芽孢杆菌Anti-Phospho NCF4 (Thr154) Antibody 异常汉逊酵母Anti-Phospho MYL12A (S19/S20) Antibody 细链格孢Anti-Phospho NCOA2 (Ser736) Antibody 硬毛栓孔菌Anti-Phospho NEK9 (Thr210) Antibody 济南诺卡氏菌Anti-Phospho NF2 (Ser518) Antibody 死亡谷芽孢杆菌Anti-Phospho NFAT5 (Ser1197) Antibody 帽形黄色土杆菌Anti-Phospho NIBAN2 (Ser679/683) Antibody 大肠埃希氏菌Anti-Phospho NIFK (Thr234) Antibody 黑根霉Anti-Phospho ODF2 (S796) Antibody 蚁巢伞属Anti-Phospho PFKFB2 (Ser483) Antibody 浅黄金色单胞菌Anti-Phospho OXSR1 (Thr185) Antibody 苏云金芽孢杆菌Anti-Phospho PAK1 (Thr84) Antibody 大肠埃希氏杆菌Anti-Phospho PFKFB2 (Ser483) Antibody 根瘤菌Anti-Phospho PIKFYVE (Ser307) Antibody 矩圆黑盘孢Anti-Phospho PLK1 (Ser482,486,490) Antibody 宛氏拟青霉Anti-Phospho PLD1 (Ser561) Antibody 牡蛎疱疹病毒LAMP试剂盒MAP激酶激活死亡域蛋白2C抗体Porcine ABCA1(ATP-binding cassette transporter A1) ELISA Kit 甲状腺素5'脱酶3抗体Porcine Ntn4 (Netrin 4) ELISA Kit D型阿片受体抗体Porcine EMILIN 1 (Elastin Microfibril Interface Located Protein 1) ELISA Kit 畸形表皮自调节因子1抗体Porcine BMP-4 (Bone Morphogenetic Protein 4) ELISA Kit 脑发育同源蛋白2抗体Porcine C3bR (Complement Fragment 3b Receptor) ELISA Kit 周期素D相互作用蛋白1抗体Porcine TR (Testosterone Receptor) ELISA Kit 发育相关蛋白DDX3Y抗体Porcine CD4 (Cluster of Differentiation 4) ELISA Kit 核仁蛋白NAP57抗体Porcine BCL2L1/BCL-X (Bcl-2 Like Protein 1) ELISA Kit |