操作步骤: 1:样品准备:取1毫升细胞培养上清(贴壁和悬浮细胞都可以 已培养48小时以上),在16000g离心5分钟,小心弃去上清,避免丢失沉淀(沉淀量有可能很少,目视看不到)。将沉淀用无菌PBS重悬,在16000g离心5分钟,同样小心弃去上清,如此反复用无菌PBS洗三次 将获得的沉淀用100微升超纯水重悬,置于100℃水浴中孵育5分钟。如此制备好的样品可在4℃保存1到2个月。 2:PCR反应的准备: 待各组份融化后先瞬时离心,然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系,每次实验需加一个阴性和一个阳性对照,测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌,并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染,推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。 服务流程: 接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。 产品名称 | 英文名称 | 货号 | 戈尔迪勒病毒RT-LAMP试剂盒说明书 | RT-LAMP Kit | BJ-P987958 |
它具有下列特点: 1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。 2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增鲍疱疹样病毒,与其他植物没有交叉反应。 3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。 4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。 5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 使用及效果: PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。 储存条件: 仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 PCR实验方法步骤: 方法 1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。 3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 50g链格孢Anti-CCL16 Antibody 100g酿酒酵母Anti-CCL2 Antibody 500g微红帚霉Anti-CCL2 Antibody 25g加利利链霉菌Anti-CCL21 Antibody 5g隆德假单胞菌Anti-CCL20 Antibody 1g大肠埃希氏菌Anti-CCL2 Antibody 5g MG1655 ΔendA ΔrecA (DE3) Anti-CCL3 Antibody 1g茯苓Anti-CCL4 Antibody 5g耐热裸囊菌Anti-CCL26 Antibody 100mg酿酒酵母Anti-CCL3 Antibody 1g乳酸菌计数模拟乳粉质控样品Anti-CCL26 Antibody 250mg大肠埃希菌Anti-CCL7 Antibody 1g局限青霉Anti-CCL4 Antibody 25g短波单胞菌属Anti-CCL4 Antibody 5g小单孢菌Anti-CCL6 Antibody 1g谷氨酸棒杆菌Anti-CCL5 Antibody 25g里亚氏须腹菌Anti-CCN1 Antibody 戈尔迪勒病毒RT-LAMP试剂盒说明书Rat IgA/FITC 荧光素标记兔抗大鼠IgA抗体腺相关病毒5 VP1抗体4-甲基-2-甲Mouse Lp-a (Lipoprotein a) ELISA Kit ABI1/SSH3BP1/FITC 荧光素标记ABI1/SSH3BP1蛋白抗体IgG脂肪脱氢酶抗体4-甲基-2-甲Mouse Lp-PL-A2 (Lipoprotein-associated Phospholipase A2) ELISA Kit ACD/PTOP/FITC 荧光素标记肾上腺皮质发育异常蛋白抗体IgG抗利尿激素1A抗体4-甲基-2-甲Mouse PAL (L-Phenylalanine ammonla-lyase) ELISA Kit ACE1/FITC 荧光素标记血管紧张素转换酶抗体IgG抗利尿激素受体1B抗体2-氨基-4-甲Mouse LHRH (Luteinizing Hormone-Releasing Hormone) ELISA Kit ACE2/FITC 荧光素标记血管紧张素转换酶2抗体IgG二磷酸腺苷核糖基化因子鸟嘌呤核苷酸交换因子2抗体2-氨基-4-甲Mouse LFA-3 (lymphocyte function associated antigen 3) ELISA Kit ACEI/FITC 荧光素标记血管紧张素1转换酶抑制剂抗体IgGα增强子结合蛋白1抗体4-苄氧基吡啶-N-氧化物Mouse Lptn/XCL1 (Lymphotactin) ELISA Kit Acetyl CoA Carboxylase/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠、猴、牛乙酰辅酶A羧化酶抗体IgG脊髓小脑共济失调10抗体4-苄氧基吡啶-N-氧化物Mouse LZM (Lysozyme) ELISA Kit Phospho-Acetyl CoA Carboxylase(Ser79) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠、猴、牛磷酸化乙酰辅酶A羧化酶抗体IgG蛋白激酶A锚定蛋白7抗体肉桂基氯Mouse BSP (Bone Sialoprotein) ELISA Kit |