操作步骤: 1:样品准备:取1毫升细胞培养上清(贴壁和悬浮细胞都可以 已培养48小时以上),在16000g离心5分钟,小心弃去上清,避免丢失沉淀(沉淀量有可能很少,目视看不到)。将沉淀用无菌PBS重悬,在16000g离心5分钟,同样小心弃去上清,如此反复用无菌PBS洗三次 将获得的沉淀用100微升超纯水重悬,置于100℃水浴中孵育5分钟。如此制备好的样品可在4℃保存1到2个月。 2:PCR反应的准备: 待各组份融化后先瞬时离心,然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系,每次实验需加一个阴性和一个阳性对照,测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌,并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染,推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。 服务流程: 接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。 产品名称 | 英文名称 | 货号 | 卡奇谷病毒RT-LAMP试剂盒价格 | RT-LAMP kit for karchi Valley virus | BJ-P987639 |
它具有下列特点: 1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。 2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增鲍疱疹样病毒,与其他植物没有交叉反应。 3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。 4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。 5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 使用及效果: PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。 储存条件: 仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 PCR实验方法步骤: 方法 1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。 3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 1g酿酒酵母Human SMURF2(E3 ubiquitin-protein ligase SMURF2) ELISA Kit 5g嗜酸乳杆菌Human SERBP1 (Plasminogen activator inhibitor 1 RNA-binding protein) ELISA KIT 1g香菇Human CAPN15 (Calpain-15) ELISA KIT 5g平脐儒孢菌Human SGIP1 (SH3-containing GRB2-like protein 3-interacting protein 1) ELISA KIT 10MG冬虫夏草Human SH3BP5L (SH3 domain-binding protein 5-like) ELISA KIT 250mg酿酒酵母Human SETX (Probable helicase senataxin) ELISA KIT 1g哈茨木霉Human SHCBP1 (SHC SH2 domain-binding protein 1) ELISA KIT 1g蓝绿小四孢菌Human SAV1 (Protein salvador homolog 1) ELISA KIT 250mg酿酒酵母Human IREB2(Iron-responsive element-binding protein 2) ELISA Kit 1g枯草芽孢杆菌Human RFNG (Beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase radical fringe) ELISA KIT 250mg短双歧杆菌Human SASH1(SAM and SH3 domain-containing protein 1) ELISA Kit 1g西班牙糖丝菌Human SASH3 (SAM and SH3 domain-containing protein 3) ELISA KIT 1g匍枝根霉原变种Human RHO (Rhodopsin) ELISA KIT 5g桂花地霉Human RBPMS2 (RNA-binding protein with multiple splicing 2) ELISA KIT 100ml竹喙球菌Human SERGEF (Secretion-regulating guanine nucleotide exchange factor) ELISA KIT 1g黄柄曲霉Human SELPLG (P-selectin glycoprotein ligand 1) ELISA KIT 25g鲑色锁掷酵母Human ALOX15B(Arachidonate 15-lipoxygenase B) ELISA Kit 卡奇谷病毒RT-LAMP试剂盒价格phospho-c-Jun (Ser243) 磷酸化原癌基因c-Jun抗体磷酸二氢双(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)钡 水合物Human ANXA5 (Annexin A5) ELISA Kit phospho-c-Jun (Thr93) 磷酸化原癌基因c-Jun抗体长春胺环烷羧酸Human HTRA1 (HtrA Serine Peptidase 1) ELISA Kit phospho-c-Jun (Ser63) 磷酸化原癌基因c-Jun抗体盐酸咪达普利环烷羧酸Human IL10Rβ (Interleukin 10 Receptor Beta) ELISA Kit Jun B 活化蛋白激酶B抗体盐酸艾司洛尔环烷羧酸Human IGF1R (Insulin Like Growth Factor 1 Receptor) ELISA Kit Jun D 活化蛋白激酶D抗体磷酸哌喹L-缬氨酸乙酯盐酸盐Human HYOU1 (Hypoxia Up Regulated 1) ELISA Kit CK I alpha/STK 属丝/苏氨酸蛋白质激酶抗体瑞格列奈L-缬氨酸乙酯盐酸盐Human IAA (Insulin Autoantibody) ELISA Kit CK II Alpha/STK 属丝/苏氨酸蛋白质激酶抗体盐酸伐昔洛韦L-缬氨酸乙酯盐酸盐Human ICAM4 (Intercellular Adhesion Molecule 4) ELISA Kit CK II alpha/STK 属丝/苏氨酸蛋白质激酶抗体奥美拉唑钠3-羧基苯磺酸Human IDE (Insulin Degrading Enzyme) ELISA Kit |